食蟹猴MCAO模型-产品标准

食蟹猴缺血性脑卒中模型产品标准规范

1 脑卒中的概念

脑卒中又称中风，具有致残率高、复发率高和病死率高等特点；脑卒中可分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，出血性脑卒中和缺血性脑卒中，其中缺血性脑卒中约占85%，出血性脑卒中约占15%。缺血性脑卒中患者临床症状主要表现为：运动障碍、感觉功能及语言功能障碍，从而出现上下肢偏瘫、面瘫、言语不清等。

2 大脑中动脉M1段缺血再灌注的依据

临床上缺血性脑卒中患者主要是单侧大脑中动脉闭塞导致的。大多数患者在卒中后48小时内会得到溶栓治疗，再灌注会导致脑组织进一步损伤；大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）根据解剖结构可分为M1、M2、M3、M4，其供血区域越往后越小，因此采用开颅法短暂夹闭大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion，MCAO）建立缺血再灌注食蟹猴脑卒中模型拟临床缺血性脑卒中。

3 模型构建流程

4 造模方法

建立食蟹猴左侧大脑中动脉M1段缺血再灌注损伤动物模型，动物吸入性麻醉，自左侧眶缘后外侧1 cm、颧骨颞突上缘处，至左侧上颞线、眶缘后2 cm处的切开头皮、皮下组织，分离颞肌、筋膜、骨膜，显露颅骨。环绕蝶骨嵴外侧部切开颅骨2×2 cm；打开硬脑膜；充分解剖暴露MCA M1起始端，用无损伤血管钳夹闭MCA M1起始端，夹闭1 h后松开血管钳恢复血流，缝合肌肉和皮肤。假手术组除不夹闭大脑中动脉M1段外，其余操作同模型组一样。

图1：食蟹猴左侧大脑中动脉M1段缺血再灌注损伤手术示意图。

5 成模标准

5.1 行为学评分

术前、术后1、3、5、7天，根据《食蟹猴神经功能缺损评分表》（Hua zhu et al, 2011）进行行为学评分，见附录A。模型组动物的神经功能缺损评分应显著高于假手术组动物。

图1：MCAO术后动物的行为学评分。（1）假手术组动物的神经功能缺损评分在术后1天时略高，随后逐渐恢复正常。（2）模型组动物在MCAO术后1~3天神经功能缺损评分逐渐升高，随后逐渐降低，在术后第3天神经功能缺损评分达到峰值；各个时间点与假手术组比较，均具有统计学差异。（3）依达拉奉干预组动物在MCAO术后1天神经功能缺损评分最高，随后逐渐下降；各个时间点与模型组比较具有统计学差异。

5.2 MRI扫描

在术前、MCAO术后3和7天进行MRI扫描，扫描序列有 T1WI、 T2WI、 T2W FLAIR、DWI，扫描结束后观察动物的苏醒情况，以及动物的精神行为状况。用 Weasis 软件进行图像分析，分别用T2W FLAIR和DWI序列分析水肿体积，每层水肿体积为该层水肿面积和层厚的乘积，各层的水肿体积之和为总的水肿体积。假手术动物应无水肿体信号，模型组动物的脑水肿体积应显著高于假手术组动物。

图2：MRI扫描T2W FLAIR序列和DWI序列结果。（1）假手术组动物在术前无异常信号，术后1天有轻微水肿，3天实基本无异常信号。（2）模型组动物在术前无异常信号，术后3天和7天水肿体积与假手术组比显著升高。（3）依达拉奉组在术前无异常信号，术后3天和7天水肿体积与假手术组及模型组比较均具有显著差异。

5.3 TTC染色

在手术后的第8天，对动物实施安乐死，取下大脑，冠状方向切片，每片脑组织的厚度为4 mm，用2% TTC，固定后用扫描仪扫描组织片，ImageJ进行图片分析，测量梗死面积，每层梗死体积为该层梗死面积和层厚的乘积，各层的梗死体积之和为总的梗死体积。假手术组动物应无梗死体积，模型组动物梗死体积应显著高于假手术组动物。

图3：脑组织梗死体积统计。（1）假手术组TTC染色呈现红色，无梗死体积。（2）模型组TTC染色正常组织呈现红色，梗死组织呈现白色，梗死体积显著大于假手术组。（3）模型组TTC染色正常组织呈现红色，梗死组织呈现白色，梗死体积与假手术组和模型组比较均具有显著差异。

附录A

（规范性）

类别	神经功能	分数范围
意识 (0-28分）	正常警觉性，有强的攻击性和逃离倾向	0
	有意识但情绪稍低落，尚有较强的攻击性	2
	有意识且有较弱的攻击性	4
	有意识且有轻微反抗和明显逃离倾向	6
	有意识但情绪低落且不反抗	8
	昏昏欲睡，声音刺激能唤醒	10
	昏昏欲睡，声音刺激能睁眼	16
	昏迷，持续声音刺激能唤醒	20
	轻度昏迷，仅有反射运动	24
	深度昏迷，没有运动	28
骨骼肌肉协调 (0-18分）	正常，行走正常	0
	总体运动协调性有轻微异常（共济失调发生为一过性间歇性）	2
	最小程度的共济失调，步态有轻微异常	4
	共济失调，但能攀登铁笼	6
	受到威逼刺激能够行走，攀爬困难	8
	本能地站立，行走几步就倒下	10
	坐着（不能站立），受到威逼刺激只能旋转身体	12
	坐着或趴着（不能站立或长时间保持坐姿），对威逼刺激有反应	14
	只能侧躺或仰面躺，对威逼刺激有反应	16
	没有活动，对威逼刺激几乎没有反应	18
感觉系统（0-22分）		L/R
面部反应	面部对威逼刺激都有协调反应（攻击，威胁，躲避，示好等）	0/0
	面部对威逼刺激的协调反应性降低（攻击，威胁表情明显减少）	1/1
	面部对威逼刺激的协调反应性明显降低（示好表情明显减少）	2/2
	感觉缺失，接触刺激面部任何部位都没有反应	3/3
耳颤反射	耳朵颤动能力正常	0/0
耳颤反射	动耳朵能力轻微降低，对声音刺激有动耳反应	1/1
耳颤反射	动耳朵能力明显降低，对声音刺激没有动耳反应	2/2
耳颤反射	感觉缺失，接触刺激时不表现出耳朵颤动	3/3
疼痛反射（下肢）	脚趾对接触刺激有完全、快速的收缩反应	0/0
	脚趾对接触刺激有较快速的收缩反应	1/1
	脚趾对接触刺激有较慢的收缩反应	2/2
	脚趾对接触刺激有弱的、慢的、不完全的、不协调的收缩反应	3/3
	脚趾对接触刺激有极弱的、慢的、收缩反应	4/4
	感觉缺失，脚趾对接触刺激没有收缩反应	5/5
运动系统（0-32分）		L/R
手	正常	0/0
	轻微运动障碍（速度稍慢、力量稍弱、准性稍差）	1/1
	力量/技巧减弱（运动障碍相对明显）	2/2
	较重度的运动障碍（速度很慢、力量很弱、准性很差）或不动	3/3
	麻痹/无运动能力	4/4
腿	正常	0/0
	轻微运动障碍（速度稍慢、力量稍弱、准性稍差）	1/1
	膝盖弯曲站立（运动障碍相对明显）	2/2
	较重度的运动障碍（速度很慢、力量很弱、准性很差）	3/3
	能动，但不能站立	4/4
	能动，不能站立，但几乎不动	5/5
	麻痹/无运动能力	6/6
手指	正常	0/0
	轻度痉挛和无力（表现为手指抓握时有翘指）	1/1
	中度痉挛和无力（表现为手指抓握时有持续翘指）	2/2
	明显痉挛和无力	3/3
脚趾	正常	0/0
	轻度痉挛和无力（表现为脚趾抓握时有翘趾）	1/1
	中度痉挛和无力（表现为脚趾抓握时有持续翘趾）	2/2
	明显痉挛和无力	3/3
总分