非酒精性脂肪肝（模型自发）食蟹猴模型-产品标准规范

非酒精性脂肪肝（模型/自发）食蟹猴

1 非酒精性脂肪肝病的概念

非酒精性脂肪肝病：Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD，是指除酒精和其他明确的肝损害因素所导致的，以肝细胞脂肪过度沉积为主要表现的一种疾病。临床表现为：（1）部分病人可有乏力、消化不良、肝区隐痛、肝脾肿大等症状；（2）体重超重和（或）内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征相关症状。NAFLD患者病理呈现以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性，肝细胞气球样变为主要特征。

2 非酒精性脂肪肝病机制

由于NAFLD发病机制复杂，其发病机制包括肝细胞线粒体功能障碍、胰岛素抵抗、免疫系统紊乱诱导炎症反应、遗传因素等。

自发性的非酒精性脂肪肝病与遗传因素较为密切，NAFLD的遗传生物标记包括DNA序列变异，例如单核苷酸多态性（SNP）中的PNPLA3基因突变，使其突变蛋白在脂滴中积累并诱导肝脏脂肪变性，导致甘油三酯在干细胞聚集从而诱发NAFLD生成。

高脂诱导的非酒精性脂肪肝病机制主要是由于过度摄入高脂肪饮食，导致肝脏中脂质的大量积累，脂质从头合成的过程中会产生大量的中间产物，如单酰甘油和二酰甘油等，引起肝细胞代谢紊乱、肝细胞线粒体功能障碍等。除此之外，高脂肪饮食同样会引起胰岛素抵抗，胰岛素抵抗可使外周脂解、肝摄取游离脂肪酸（FFA）增加，引起细胞β氧化产生过多ROS，造成肝细胞损伤，促进脂肪性肝炎的发生。

3 模型构建流程

4 成模时间

（1）自发：经过动物筛选即可判断动物模型情况。

（2）模型构建：经过高脂饲料喂养，6个月可成模。

5 自发模型筛选标准

非酒精性脂肪肝患者特性主要表现为肥胖、中年年龄，通过这一特性挑选可能存在脂肪肝的动物，再进行B超检查来确认脂肪肝情况。动物筛选标准为：年龄≥8岁，体重≥8.0 kg，BMI≥40，B超提示为脂肪肝。

6 高脂饲料诱导成模标准

6.1 生理指标

高脂饲料造模3个月，动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI升高，3个月后指标维持稳定。

注：“*”代表与0 mth比较，0.01<*P<0.05；**P<0.01。

图1：高脂饲料饲养造模后动物生理指标变化。（1）动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI在0到3个月升高。（2）动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI在3到6个月趋于稳定。

6.2 血生化指标

通过给高脂饲料造模，根据动物血生化指标分析评估非酒精性脂肪肝病模型，验证高脂饲料诱导构建NAFLD模型后，动物出现血脂、肝功能异常。

注：“*”代表与0 mth比较，0.01<*P<0.05；**P<0.01。

图2：高脂饲料诱导NAFLD模型猴的血生化指标变化。（1）高脂饲料喂养6个月后，NAFLD模型猴的总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、动脉粥样硬化指数（AI）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、胆碱酯酶（CHE）显著升高。（2）高脂饲料喂养6个月后，NAFLD模型猴的空腹血糖（FPG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰基转移酶（γ-GGT）有上升趋势。

6.3 B超指标

通过给高脂饲料造模，根据动物B超分析评估非酒精性脂肪肝病模型肝脏变化，验证高脂饲料诱导构建NAFLD模型后，动物肝脏存在脂肪肝情况。