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细胞生物学实验
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• 细胞增殖 细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
自噬与多种生理反应相关，比如肿瘤，炎症，免疫应答，氧化应激等。通常情况下，对于自噬的研究，除了发生的机制本身外，更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来。比如研究自噬在肿瘤的发生发展，炎症反应，氧化应激等不同生物学功能的作用。
肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连，然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原，使基质成分降解，最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处，如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。
迁移是肿瘤细胞转移过程中必不可少的环节之一。肿瘤细胞与母体瘤分离，穿越血管壁，侵袭周边正常组织时，需要一定的运动能力。高转移的肿瘤细胞通常具备较强的运动性。多种物质可剌激肿瘤细胞的迁移，如肿瘤细胞分泌因子、生长因子、细胞外基质成分(FN、LN)以及一些癌转移靶器官的代谢产物或分泌产物等生长因子对肿瘤细胞有趋化作用，可使其发生定向运动。
• 血管生成 血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速，因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响。 |
• 原代细胞分离与培养
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。通过原代分离获得的细胞具有与体内细胞相似的生物学特征，是研究生物体相关生命活动的理想材料。
• 细胞周期检测
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时期的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N）,而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
• 细胞凋亡检测
细胞凋亡是细胞主动实施的一种程序性死亡，是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
• 免疫磁珠细胞分选
用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。
• 慢病毒载体构建
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装到重组的假病毒载体所需要的所有捕助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染。
慢病毒系统可以转染多种细胞类型如原代细胞、干细胞、非分裂细胞等，实现可重复的稳定表达。对于一些较难转染的细胞，慢病毒系统采用病毒包装外源基因方式进入细胞并稳定表达，是一种理想的基因表达工具。慢病毒通过顺式作用元件将病毒运送入细胞核，将所要表达的基因序列重组整合到细胞的基因组中，从而实现目的序列持续稳定的高表达。
• 耐药细胞株构建
肿瘤细胞/癌细胞的耐药性是肿瘤/癌症难以根治的重要原因。体外构建的耐药细胞株，能模拟肿瘤细胞/癌细胞对特异药物耐药性的形成过程，有助于人们理解肿瘤细胞/癌细胞获得耐药性的机制，筛选获得抗耐药性的特异药物，并对相关疾病进行有针对性地临床治疗。
• shRNA载体构建
首先设计根据需求设计shRNA引物一套，完成引物退火。将载体进行双酶切反应，双酶切后割胶回收。将shRNA和双酶切回收后的载体，使用试剂盒进行重组成环状片段，转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落送测序公司进行测序鉴定，比对正确的克隆即为构建成功的shRNA表达载体。shRNA的靶点选择决定着对靶向基因的表达敲低效果，通常涉及3-4个shRNA靶点同时进行实验，根据后续检测结果确定最佳靶点后，安排后续实验。
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